HPLC以它定量分析結果準確、分析周期短、分析范圍廣及分析檢測限低等優勢，在食品添加劑、藥物成分分析等多領域得到了廣泛的應用。本文由譜析儀器工程師依據LC-3000液相色譜儀在實際操作時應注意的事項及維護做簡單介紹，供大家參考。

　　主要部件介紹

　　輸液系統：輸液系統主要包括在線脫氣裝置、高壓輸液泵、梯度洗脫裝置。在線脫氣裝置主要功能是流動相在進入柱子前排除氣泡。高效液相色譜柱的填料顆粒小，通過2～5mm的色譜柱受到的流動阻力很大，因此需要通過高壓輸液泵抽取流動相輸送至色譜柱。

　　高壓泵按輸液性能可分為恒壓、恒流泵。按機械結構可分為：液壓隔膜泵、氣動放大泵、螺旋注射泵和往復柱塞泵。

　　進樣器：進樣器是將分析樣品送入色譜柱的裝置，分為手動、自動進樣器兩種。手動進樣器一般配有20~100μL的定量環。

　　色譜柱：色譜柱以液體為流動相，以廣義的固相為固定相來進行分析樣品的分離工作。色譜柱按照分離模式大致可以分為正相色譜柱和反相色譜柱。

　　檢測器：檢測器是將色譜柱分離出樣品的物理或化學特性轉換為可以測量的電信號，通過色譜圖記錄下來，由色譜圖中的峰形狀判斷分離效果，依據標物、分析樣色譜圖的出峰時間、峰面積分別對樣品進行定性定量分析。

　　維護及使用注意事項

　　1.開關機操作注意

　　分析準備工作做好后，依次打開液相色譜儀穩壓電源、高壓輸液泵、柱溫箱、檢測器，待各部件自檢結束，打開連接液相色譜儀器的電腦，啟動工作軟件。分析工作結束后，關閉工作軟件，再依次關閉檢測器、柱溫箱和高壓輸液泵。

　　2.對流動相的要求

　　為保證液相色譜儀器的正常使用，所有流動相必須是色譜級的，且經過過濾雜質、排除氣泡后裝入干凈的流動相貯存瓶中待用。

　　(1)流動相的物理化學性能要求

　　對分析物要有足夠的溶解能力，以利于提高檢驗的靈敏度;流動相的黏度要小，以保證合適的柱降壓;流動相的沸點要低，以利于制備分離時樣品的回收;流動相的 PH 值一般應在 2~7.5;使用期限不得超過 2 天，否則產生細菌污染管路。

　　(2)流動相的過濾

　　流動相在使用前都必須經過濾，以除去雜質微粒。同時要定期清洗吸濾頭，以防雜質通過其進入流動相。應依據其是否是水溶性選擇水膜或有機膜(0.45 μm 或 0.22 μm)，使用溶劑過濾裝置，通過真空泵抽氣過濾。

　　(3)流動相的脫氣

　　流動相必須預先脫氣，否則易產生氣泡，影響泵的工作。此外，溶解在流動相中的氧能與某些有機溶劑形成有紫外吸收的絡合物，提高背景吸收，會在梯度洗脫時造成基線漂移或形成鬼峰。常有的脫氣方法有在線真空脫氣法、超聲波脫氣法、抽真空脫氣法三種。

　　3.色譜柱的維護及使用注意事項

　　所有分析樣品zui好把pH值調節到適合色譜柱的pH值范圍內。進樣要避免超負荷，這是保持色譜柱性能持久良好的重要方法之一。手動進樣器進樣的話，進樣時動作要快速準確。分析物成分復雜時，要在色譜柱前加色譜保護柱以保護色譜柱。每次分析工作開始時，要對色譜柱進行平衡，用含10%流動相中的有機溶劑的水溶液進行排氣和沖洗色譜柱和管路，沖洗30分鐘左右，將色譜柱中的純有機溶劑替換掉，然后再用至少10倍柱體積的流動相平衡色譜柱，直至基線平衡后方可進樣。

　　每次分析工作結束后，一定要立即用一定量的水溶液徹底沖洗色譜柱中的緩沖鹽液，再用對被測物洗脫能力強的溶劑來沖洗色譜柱，沖洗時間不能小于1小時，洗脫溶劑的用量至少為柱體積的20倍。若不及時沖洗色譜柱，雜質長時間積累在其中，易堵塞色譜柱，降低柱效性能。長期這樣，會加速減少色譜柱使用壽命。色譜柱4天以上不使用，應從儀器上取下，用封頭螺帽把兩頭緊緊密封。色譜柱保存時注意不要強烈震動、碰撞。

　　4.高壓輸液泵的維護及使用注意事項

　　每次分析工作結束后，都應及時清洗泵。當有緩沖鹽做流動相時，緩沖鹽與有機溶劑互相交換前一定要用5%的甲醇水溶液清洗泵，防止鹽在有機相中結晶損壞泵中各組件。緩沖鹽溶液的濃度不要過高，要控制在5%以下，否則高濃度的緩沖鹽會磨損密封墊和活塞，降低其使用壽命。長時間使用高濃度的緩沖鹽，必須用10%的異丙醇色譜級溶液清洗泵，從而保護柱塞和密封墊。

　　輸液泵工作前要設置工作壓力范圍，正常工作壓力一般不要超過 30 Mpa，否則經常高壓會使密封環變形，產生漏液。平時分析工作要養成記錄壓力的好習慣，這樣如果工作壓力超過平時正常壓力的10%~15%，就應及時查找原因。

　　5.紫外檢測器的維護及使用注意事項

　　紫外檢測器（UV）有一定的使用壽命，所以平時應盡量減少氘燈的使用時間，在柱平衡進行一大半之后，在走基線之前，打開檢測器光源;分析結束后即可關閉檢測器光源。要保持檢測器四周環境清潔，實驗室盡量少開窗戶，定期地面進行吸塵工作，防止檢測器工作時由于靜電吸附灰塵顆粒覆蓋在光學元件上。檢測器池內存在氣泡就會產生噪音，噪音會干擾定量分析，所以流動相須充分脫氣后再使用。

　　應定期清洗流通池。如觀察到流通池內部無氣泡或臟物，應清洗流通池。通過注射器用異丙醇等有機溶劑沖洗池內，以清洗透鏡。如是含有緩沖鹽的溶劑作流動相，應在使用異丙醇沖洗前用水替換池中原先有的溶劑。