色譜那些事:液相色譜氨基柱的使用(第三期)
2019-02-09 20:52:36來源:admin
“色譜那些事 ” 回顧:硅膠基質和聚合物基質色譜柱的保存,色譜柱對液相色譜系統的要求
本期內容:液相色譜氨基柱的使用
氨基柱簡介
氨基柱,全稱氨丙基鍵合硅膠色譜柱,色譜柱家族中最靈活的色譜柱,不僅可以用于正反相還可以應用于離子交換(弱陰離子交換柱)中。
氨基柱的鍵合官能團氨丙基要比C18,C8柱的鍵合官能團更容易水解,特別是當你的使用條件是反相條件下時,要特別注意控制pH值范圍,pH值越低越有發生水解的危險;
流動相中水的比例越高當然也越有發生水解的危險(建議水比例不超過40%)。
提示:在使用后以及準備長時間放置該柱時,必要的清洗和將氨基柱保存于純的有機溶劑中是很好的保養措施。
氨基柱的活化
對于新氨基柱,首先應詳細閱讀使用說明書,了解柱子出廠保存溶劑。一般出廠會保存在正相溶劑中,如果保存溶劑與你將要使用的流動相極性不同不互溶,請先用異丙醇過渡。過渡過程中應注意異丙醇粘度較大,會導致柱壓很高,應使用小流速過渡。
當使用反相模式時,用前請使用異丙醇小流速過夜平衡色譜柱。流速建議0.1-0.2mL/min,之后再轉換到100%乙腈沖洗20柱體積,然后轉換到和流動相相同比例的不含鹽的乙腈水體系沖洗20柱體積。
當使用正相模式時,如與出廠保存溶劑互溶,可使用流動相直接沖洗20倍柱體積;如不互溶請用異丙醇過渡。
氨基柱的沖洗及保存
簡單來說,正相條件下使用的氨基柱參照硅膠柱的清洗方法;反相條件下使用的氨基柱參照C18的清洗方法。
正相使用時,將柱子沖洗干凈后,用正己烷-乙腈(99:1)保存(即出廠模式)。
反相使用時,如短期不用,可用甲醇或乙腈保存;長期不用時需用異丙醇置換然后保存在正相模式下(即出廠模式)。