當使用液相色譜儀進行色譜分析時，除了解高效液相色譜法的基本理論外，還應掌握必需的實驗技術，這樣才能獲得理想的分離效果。

     在高效液相色譜分析中，當色譜柱的選擇確定后，應采用適合組成的流動相進行實驗，在實驗過程準確控制流動相的流量，防止微米數量級機械雜質阻塞流路，保持較低的柱壓力降是實驗操作中的關鍵。為此，譜析儀器工程師認為色譜工作者應當掌握以下的實驗技術：

    ① 液相色譜儀之高效液相色譜法的實驗技術解剖指導-溶劑的純化技術：
     在高效液相色譜分析中，正相色譜以己烷作為流動相主體，二氯甲烷、氯仿、乙醚作為改性劑；反相色譜以水作為流動相主體，以甲醇、乙腈、四氫呋喃作為改性劑。通常使用分析純、優級純試劑，可以滿足高效液相色譜分析的要求，但為了防止微粒雜質堵塞流路或柱入口墊片，流動相都需要用G4微孔玻璃漏斗過濾，或用0.45μm的微孔濾膜過濾后再使用。

    ② 液相色譜儀之高效液相色譜法的實驗技術解剖指導色-譜柱的填充技術：
     填充色譜柱的方法，根據固定相微粒的大小有干法和濕法兩種。微粒大于20μm的可用干法填充，要邊填充邊敲打和振動，要填得均勻扎實。直徑10μm以下的柱，不能用干法填充，必須采用濕法。

    ③ 液相色譜儀之高效液相色譜法的實驗技術解剖指導-色譜柱的保護與再生技術：
     高效液相色譜柱填充了高效全多孔球形微粒固定相，并用高壓勻漿法填充，其售價較貴，若使用不當，會出現柱理論塔板數下降、色譜峰形變壞、柱壓力降增大、保留時間改變等不良現象，從而大大縮短色譜柱的使用壽命。

    ④ 液相色譜儀之高效液相色譜法的實驗技術解剖指導-梯度洗脫技術：
    在HPLC分析中，梯度洗脫功能相似于氣相色譜分析中的程序升溫，它對改善色譜分離效果，增加峰容量，可發揮重要的作用。

    ⑤ 液相色譜儀之高效液相色譜法的實驗技術解剖指導-色譜柱前和柱后的衍生化檢測技術：
     當前在高效液相色譜法，最常用的高靈敏度檢測器是熒光檢測器和紫外檢測器，但它們只能檢測有紫外吸收或在紫外光照射下產生熒光的、具有特定化學結構的化合物。

     為了使在這些檢測器上響應值很小的化合物也能被檢測出來，通過與衍生化試劑反應，使胺、氨基酸、羧酸、醇、醛、酮等有機物生成可吸收紫外光或產生熒光的化合物。  

     ⑥ 液相色譜儀之高效液相色譜法的實驗技術解剖指導-樣品的預處理技術：
     對組成復雜的樣品或受外界條件（日光照射、受熱、電磁輻射、氧化等）作用而發生變化的不穩定樣品，都需經過預處理才能進行色譜分析。
     掌握上述各種技術，就可更自主的開展工作，并為進一步從事微柱液相色譜分析或二維液相色譜分析創造良好的前提工作條件。
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