液相色譜柱保留時(shí)間變化的原因
2021-04-20 10:23:31來源:admin
液相色譜柱保留時(shí)間不重現(xiàn)可能由多種因素引起,通常還會影響到峰面積的重現(xiàn)性,建議檢查以下幾個方面:
1、確認(rèn)流動相是新鮮配制的,比例沒有錯誤。比如一些揮發(fā)性的溶液,如乙酸,最好及時(shí)更換。
2、確認(rèn)液相色譜條件在色譜柱使用范圍之內(nèi),如 pH 范圍、溫度、壓力。
3、仔細(xì)觀察柱前壓的變化,如果壓力穩(wěn)定,就可以判斷泵的系統(tǒng)沒有問題;如果是壓力不穩(wěn)定,一定會影響保留時(shí)間,這種狀況通常是由于泵頭里有氣泡造成的。請將流動相仔細(xì)脫氣,并排出泵內(nèi)氣泡。
4、觀察色譜峰形、柱效變化情況,確認(rèn)色譜柱是否被污染,如果確定色譜柱污染,可嘗試使用適當(dāng)溶劑沖洗。
5、如果同時(shí)伴有色譜柱柱壓升高,解決方法請參見“液相色譜柱柱壓升高”部份。
6、如果使用梯度洗脫方法,請確認(rèn)平衡時(shí)間足夠長。流動相中使用離子對試劑(烷基磺酸鈉等)或固定相為正相硅膠等,往往需要更長的平衡時(shí)間。
7、確認(rèn)樣品是否過載,減少進(jìn)樣量(進(jìn)原進(jìn)樣量的 10%確認(rèn))。
8、組分在液相色譜柱中保留不夠。調(diào)整色譜條件,使樣品在柱上適當(dāng)保留。