譜析LC-1000高效液相色譜儀測(cè)定水（海）產(chǎn)品中抗生素殘留

隨著我國(guó)養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，越來(lái)越多的抗生素被應(yīng)用于漁業(yè)生產(chǎn)中，這些藥物的使用幾乎貫穿養(yǎng)殖的全過(guò)程，由于養(yǎng)殖戶不遵守休藥期規(guī)定及未正確使用藥物，造成在水產(chǎn)品中的高水平殘留。人長(zhǎng)期攝入含抗生素殘留的水產(chǎn)品后，藥物不斷在體內(nèi)蓄積，當(dāng)濃度達(dá)到一定量后，就會(huì)對(duì)人體產(chǎn)生毒性作用，四環(huán)素類藥物的毒性反應(yīng)主要表現(xiàn)為對(duì)胃、腸、肝臟的損害及牙齒的染色等。還會(huì)造成過(guò)敏反應(yīng)，二重感染，致畸胎作用。而氯霉素、頭孢曲松鈉有嚴(yán)重的副作用，它能抑制人體骨髓造血功能而引起再生障礙性貧血和粒狀白細(xì)胞缺乏癥等疾病，對(duì)人類的健康構(gòu)成潛在的危害。因此，水產(chǎn)品中抗生素殘留量的檢測(cè)技術(shù)，日益受到國(guó)內(nèi)外學(xué)者的關(guān)注。譜析儀器分析方案采用固相萃取（SPE）-LC-1000高效液相色譜儀分析法進(jìn)行6種抗生素的同時(shí)固相萃取和測(cè)定的蕞佳條件，結(jié)果令人滿意。

 

                             



 

譜析LC-1000液相色譜儀測(cè)定水（海）產(chǎn)品中抗生素殘留

 

1、儀器與試劑

 

高效液相色譜儀LC-1000，二極管陣列檢測(cè)器，G1313A ALS自動(dòng)進(jìn)樣器； C18 5μm 250mm×4.6mm液相色譜柱。固相萃取小柱為ZORBAX SPE C18Cart。12頭固相萃取真空富集裝置。超聲波清洗器KS—500D，超速離心機(jī)LD4 —2，攪肉機(jī)，渦旋混合器。甲醇(色譜純)，磷酸二氫鈉(分析純)，EDTA(分析純)，高氯酸溶液(優(yōu)級(jí)純)、硝酸(優(yōu)級(jí)純)。土霉素、四環(huán)素、金霉素、氯霉素、青霉素、頭孢曲松鈉標(biāo)準(zhǔn)品。

 

2、高效液相色譜分析條件

 

色譜柱為 C18  5μm 250mm×4.6mm，流動(dòng)相為0.O1mol/L磷酸二氫鈉+0.001 mol/L EDTA:甲醇=60:40(V/V，pH=2.0)，流速為0.8ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為268nm柱溫為25℃，進(jìn)樣量為20μl。

 

3、實(shí)驗(yàn)方法

 

(1)土霉素、四環(huán)素、金霉素、氯霉素、青霉素、頭孢曲松鈉標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的配制

 

分別稱取O.0100mg土霉素、四環(huán)素、金霉素、氯霉素、青霉素、頭孢曲松鈉標(biāo)準(zhǔn)品置于6個(gè)1Oml容量瓶中，分別加入甲醇溶解并定容至刻度，此溶液濃度分別為1.00mg/ml，置于冰箱冷藏室保存。

 

(2)混合標(biāo)準(zhǔn)中間液的配制

 

分別吸取土霉素、四環(huán)素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液各1.00ml，金霉素、氯霉素、青霉素、頭孢曲松鈉標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液各 2.00m1.置于100ml容量瓶中，用流動(dòng)相A液定容至刻度，此溶液濃度分別為：土霉素(10μg/m1)、四環(huán)素(10μg/m1)、金霉素(20μg/m1)、氯霉素(20μg/m1)、青霉素(20μg/m1)、頭孢曲松鈉(20μg/m1)，置于冰箱冷藏室保存。

 

(3)標(biāo)準(zhǔn)使用液的配制

 

準(zhǔn)確吸取混合標(biāo)準(zhǔn)中間液0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、 8.0、10.0ml分別置于1Oml容量瓶中，用流動(dòng)相A液定容至刻度，得到的標(biāo)準(zhǔn)系列為：0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、 8.0、10.0μg/m1(土霉素、四環(huán)素)；0.2、0.4、1.0、2.0、4.0、8.0、12.0、16.0、20.0μg/m1(金霉素、氯霉素、青霉素、頭孢曲松鈉)。

 

(4)流動(dòng)相A液的配制

 

0.01mol/L磷酸二氫鈉+0.001mol/L EDTA，用30%硝酸調(diào)至pH=2.0，經(jīng)0.45μm雙層水系濾膜過(guò)濾。

 

(5)流動(dòng)相B液的配制

 

0.01mol/L磷酸二氫鈉，用30%硝酸調(diào)至pH=2.0，經(jīng)0.45μm雙層水系濾膜過(guò)濾。

 

(6)樣品前處理

 

準(zhǔn)確稱取5.00g攪碎的水產(chǎn)品于5Oml帶蓋的塑料離心管中，加入20%高氯酸溶液 15ml，渦旋1min，將此離心管放入超聲波清洗器中提取20min后，用離心機(jī)離心10min，收集上清液于25ml容量瓶中，往殘?jiān)屑尤?Oml 2%高氯酸溶液，用玻棒攪動(dòng)使樣品均勻分散于高氯酸溶液中，將此離心管放入超聲波清洗器中提取20min后，用離心機(jī)離心10min，收集上清液于上述 25ml容量瓶中，合并兩次上清液，用2%高氯酸溶液定容，取該提取液1O ml經(jīng)已調(diào)節(jié)的固相萃取小柱吸附，用10%甲醇水2ml沖洗固相萃取小柱，用50%甲醇水1ml洗脫后收集備用。

 

(7)樣品測(cè)定

 

吸取樣品溶液20μl進(jìn)樣，進(jìn)行HPLC分析，記錄六種抗生素的峰面積。根據(jù)6種抗生素的保留時(shí)間和紫外吸收光譜圖定性，峰面積定量。

 

譜析點(diǎn)評(píng):通過(guò)高氯酸沉淀蛋白質(zhì)、超聲波提取樣品、固相萃取的前處理方法，以及優(yōu)化高效液相色譜條件下，成功地進(jìn)行了水產(chǎn)品中土霉素、四環(huán)素、金霉素、氯霉素四種抗生素殘留同時(shí)進(jìn)行固相萃取和高效液相色譜測(cè)定的方法研究，目前已檢測(cè)蝦、蟹、鯇魚、鯽魚共印份。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：該方法測(cè)定靈敏度高、穩(wěn)定性好、簡(jiǎn)便易行，四種被測(cè)組分色譜分離效果好。

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