譜析儀器:氣相色譜儀程序升溫測定肌醇含量
肌醇又稱環己六醇,是維生素類藥物及降血脂藥。可促進肝及其他組織中的脂肪代謝,用于脂肪肝、高血脂癥的輔助治療。由于肌醇分子中缺乏合適的生色團和電活性基團,難以直接用通常的分析方法測定。
肌醇含量測定方法有重量法、微生物法和高碘酸鉀氧化法,亦有HPLC法和GC法。微生物法和重量法操作繁瑣、費時,重量法測定肌醇及其制劑的含量時,還存在用樣量大、且需在氯仿萃取后揮去氯仿,有損健康;高碘酸鉀氧化法則要嚴格控制加熱氧化的時間一致,否則測定結果將會有很大的誤差;而HPLC法采用末端吸收進行檢測,誤差較大。將肌醇硅烷化處理,正己烷提取后,以程序升溫氣相色譜法測定肌醇的含量,方法簡單,結果準確快捷。
氣相色譜法測定所需儀器與試劑
氣相色譜儀GC-17配置FID檢測器,數控超聲清洗器,25ml具塞試管。
正己烷、無水硫酸鈉、二甲基甲酰胺均為分析純(二甲基甲酰胺用前需減壓蒸餾除去水分);三甲基氯硅烷,六甲基二硅胺烷,肌醇對照品、肌醇樣品等。
測定時須注意的幾個方面:
1) 由于肌醇分子中缺乏合適的生色團和電活性基團,難以直接用通常的分析方法測定。考慮到肌醇環狀飽和多羥基的結構特征,選擇將其進行硅烷化處理,以正己烷提取后進行氣相色譜分析。分別選用幾種硅烷化試劑,以及不同比例進行測試比較,確定選用二甲基氯硅烷與六甲基二硅胺烷以1∶3混合作為衍生化試劑,效果較佳。
2) 因肌醇硅烷化后氣化溫度較高,進樣室溫度選擇為260℃;試驗發現,肌醇硅烷化處理后有較多的雜峰,柱溫采用恒溫操作時,若柱溫太高,溶劑峰未回至基線,主峰就已出柱,且將雜峰包在其中;若柱溫太低,則分析流程長,且峰形嚴重拖尾;而選擇程序升溫操作,不僅可使雜峰與主峰達到較好分離,且峰形較好,保留時間適當。
3) 填充柱采用程序升溫,基線漂移較為嚴重,試驗發現,選擇兩根相同型號的色譜柱,以雙通道同時通載氣可起到平衡作用,減小基線漂移,以便較好測定。
4) 為使硅烷化反應完全,所用二甲基甲酰胺應先進行減壓蒸餾除水后使用。硅烷化反應速度較慢,應在水浴適當加熱,以加快硅烷化反應速度。
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