在化學鍵合相色譜法中，溶劑的洗脫能力直接與它的極性相關。在正相液相色譜中，溶劑的強度隨極性的增強而增加；正相色譜的流動相通常采用烷烴加適量極性調整劑。

反相液相色譜的流動相通常以水作基礎溶劑，再加入一定量的能與水互溶的極性調整劑，如甲醇、乙腈、四氫呋喃等。極性調整劑的性質及其所占比例對溶質的保留值和分離選擇性有顯著影響。一般情況下，甲醇-水系統已能滿足多數樣品的分離要求，且流動相粘度小、價格低，是反相色譜最常用的流動相。但Snyder則推薦采用乙腈-水系統做初始實驗，因為與甲醇相比，乙腈的溶劑強度較高且粘度較小，并可滿足在液相色譜儀紫外205nm處檢測的要求，因此，綜合來看，乙腈-水系統要優于甲醇-水系統，但價格較貴。  

在分離含極性差別較大的多組分樣品時，為了使各組分均有合適的k值并分離良好，也需采用梯度洗脫技術。

液相色譜儀流動相選擇事項：

1、流動相應選用色譜純試劑、高純水或雙蒸水，酸堿液及使用，過濾時注意區分水系膜和油系膜的使用范圍；

2、水相流動相需經常更換（一般不超過2天），防止長菌變質；

3、使用雙泵時，A、B、C、D四相中，若所用流動相中有含鹽流動相，則A、D（進液口位于混合器下方）放置含鹽流動相，B、C（進液口位于混合器上方）放置不含鹽流動相；A、B、C、D四個儲液器中其中一個為棕色瓶，用于存放水相流動相。

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