高效液相色譜儀分析過(guò)程中影響溶質(zhì)遷移的因素較多，同一組分在不同色譜條件下的保留值相差很大，即便在相同的操作條件下，同一組分在不同色譜柱上的保留也可能差別很大，因此，高效液相色譜與氣相色譜相比，定性的難度更大。

高效液相色譜儀分析中常用的定性方法有利用已知標(biāo)準(zhǔn)樣品定性、利用檢測(cè)器的選擇性定性和利用紫外檢測(cè)器全波長(zhǎng)掃描功能定性等。

一、利用已知標(biāo)準(zhǔn)樣品定性

利用標(biāo)準(zhǔn)樣品對(duì)未知化合物定性是最常用的高效液相色譜定性方法。

由于每一種化合物在特定的色譜條件下（流動(dòng)相組成、色譜柱和柱溫等相同），其保留值具有特征性，因此，可以利用保留值進(jìn)行定性。如果在相同的色譜條件下，被測(cè)化合物與標(biāo)準(zhǔn)樣品的保留值一致，可以初步認(rèn)為被測(cè)化合物與標(biāo)準(zhǔn)樣品相同。若流動(dòng)相組成經(jīng)多次改變后，被測(cè)化合物的保留值仍與標(biāo)準(zhǔn)樣品的保留值一致，就能進(jìn)一步證實(shí)被測(cè)化合物與標(biāo)準(zhǔn)樣品為同一化合物。

二、利用檢測(cè)器的選擇性定性

液相色譜儀的同一種檢測(cè)器對(duì)不同類(lèi)型化合物的響應(yīng)值是不相同的，而不同液相色譜儀的檢測(cè)器對(duì)同一種化合物的響應(yīng)也是不相同的。所以當(dāng)某一種被測(cè)化合物同時(shí)被兩種或兩種以上的檢測(cè)器檢測(cè)時(shí)，兩種檢測(cè)器或兩種以上的檢測(cè)器對(duì)被測(cè)化合物檢測(cè)靈敏度的比值是與被測(cè)化合物的性質(zhì)密切相關(guān)的，其可以用來(lái)對(duì)被測(cè)化合物進(jìn)行定性分析這就是雙檢測(cè)器定性體系的基本原理。

作為液相色譜儀雙檢測(cè)器體系的聯(lián)接一般分為串聯(lián)聯(lián)接和并聯(lián)聯(lián)接的兩種方式。當(dāng)色譜儀兩種檢測(cè)器中的一種是非破壞型可以采用簡(jiǎn)單的串聯(lián)聯(lián)接方式，方法就是將非破壞型檢測(cè)器串接在破壞型檢測(cè)器之前。若兩種檢測(cè)器都是破壞型則需要采用并聯(lián)方式聯(lián)接，方法是在色譜柱的出口端連接一個(gè)分別聯(lián)接在兩個(gè)檢測(cè)器上的三通。在液相色譜儀中最常用于定性鑒定工作的雙檢測(cè)體系為紫外檢測(cè)器和熒光檢測(cè)器。

三、利用紫外檢測(cè)器全波長(zhǎng)掃描功能定性

紫外檢測(cè)器是高效液相色譜中使用最廣泛的一種檢測(cè)器。全波長(zhǎng)掃描紫外檢測(cè)器可以根據(jù)被檢測(cè)化合物的紫外光譜圖提供一些有價(jià)值的定性信息。傳統(tǒng)的方法是在色譜圖上某組分的色譜峰出現(xiàn)極大值，即濃度最大時(shí)，通過(guò)停泵等手段，使組分在檢測(cè)池中滯留，然后對(duì)檢測(cè)池中的組分進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，得到該組分的紫外可見(jiàn)光譜圖，再取可能的標(biāo)準(zhǔn)樣品按同樣方法處理。對(duì)比兩者光譜圖即能鑒別出該組分與標(biāo)準(zhǔn)樣品是否相同。某些有特殊紫外光譜圖的化合物也可以通過(guò)對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)譜圖來(lái)識(shí)別。

此外，利用二極管陣列檢測(cè)器得到的色譜信號(hào)、時(shí)間和波長(zhǎng)的三維譜圖進(jìn)行定性，比傳統(tǒng)方法優(yōu)勢(shì)更大。

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